医学微生物学习方法

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医学微生物学习方法篇一：微生物学学习建议(详细的)

《医学微生物学》学习建议

一. 基本原理

(一) 细菌

1.细菌基本结构(G+菌和G--菌细胞壁区别)和特殊结构的特点、功能及医学意义

（一）细胞壁 革兰阳性菌 革兰阴性菌

厚度厚20-80nm 薄10-15nm

强度较坚韧较疏松

肽聚糖 组成 聚糖骨架 聚糖骨架

四肽侧链 四肽侧链

五肽交联桥 无

结构类型 三维立体结构二维平面结构

层数 可多达50层 1-2层

含量 占细胞壁干重50%到80%占细胞壁干重5%-20%

糖类含量 约45%15%-20%

脂类含量 1%-4%11%-22%

麟壁酸有 无

外膜 脂多糖 无 有

脂质双层 无 有

脂多糖 无有

医学意义|：革兰阳性菌 和革兰阴性菌的细胞壁结构显著不同，导致这两类细菌在染色性，抗原性，治病性及对药物的敏感性方面的很大差异。

细菌的特殊结构有荚膜，鞭毛，菌毛和芽孢。

荚膜

特点：某些细菌细胞壁外包绕的一层粘液性物质，其厚度》0.2微米，化学组成多数菌为多糖，少数为多肽

功能：具有抗吞噬作用,粘附作用进而保护菌体抗有害物质的损伤作用，是构成细菌毒力的因素之一。

医学意义：具有抗原性，可用作鉴别细菌和进行细菌分类。

鞭毛

特点：有些细菌包括所有的弧菌和螺菌，约半数杆菌和个别球菌，菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物。根据鞭毛数量和部位，分为单毛，双毛，从毛和周毛菌。

功能：它是细菌的运动器官，使细菌趋向营养物质，逃离有害物质。

医学意义：有些细菌如霍乱弧菌，空肠弯曲菌等通过活泼的鞭毛运动穿透小肠粘膜表面覆盖的粘液层，与细菌致病有关。根据鞭毛的动力和抗原性，可作鉴定细菌和进行细菌分类。

菌毛

特点：许多革兰阴性菌和少数革兰阳性菌菌体表面存在这细而短，直硬的的丝状物，必须用电子显微镜观察。

功能：分普通菌毛和性菌毛。前者遍布细菌表面，是粘附于细胞表面构成感染的必要因素。性菌毛仅见于革兰阴性菌，细菌通过性菌毛相互连接沟通，将质粒或核质DNA从供体菌转移给受体菌，称为结合。

医学意义：细菌通过结合使编码耐药性或毒力等基因在细菌之间转移和播散。

芽孢

特点：在一定环境条件下菌体内部形成的圆形或卵圆形小题，是细菌的休眠形式，

功能：它对外界理化因素有强大抵抗力，远远大于繁殖体。

医学意义：并不直接引起疾病，当成为繁殖体后大量繁殖而致病。芽孢的大小形状和位置等随菌

种而异，可用作鉴别细菌。当进行消毒灭菌时，芽孢是被杀死作为判断灭菌效果的指标。

PAMP:病原相关模式分子 LPS：脂多糖 SPA：葡萄球菌A蛋白（SPA）是绝大多数金黄色葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白可与除IgG3外的IgG分子的Fc段发生非特异性结合。二者结合后，IgG的Fab段仍然可以与特异性抗原结合，可使金黄色葡萄球菌发生肉眼可见的凝集现象。已广泛应用于多种微生物抗原

的检测（协同凝集实验）。

SPA与IgG结合后的复合物具有抗吞噬作用。SPA还有促细胞分裂、引起变态反应、损伤血小板等多

种生物活性。

。LOS：脂寡糖抗原，是脑膜炎奈瑟菌的主要致病物质；淋病奈瑟菌中和内毒素有一样活性。

F,M,C:F蛋白，M蛋白，C抗原。

H抗原：鞭毛抗原 O抗原：脂多糖最外层即为磷壁酸

2.细菌的生长繁殖条件(气体,温度,酸碱度),细菌群体生长曲线分期及各期的特点和意义

在合适条件下，细菌从外界摄取营养，进行分解代谢，获得原料和能量，同时进行合成代谢，合成菌体所需的成分。故细菌代谢的结果，使细菌得以生长繁殖。其生长繁殖必需的基本条件有4个方面。营养物质

细菌所需的营养物应按一定的方式配比提供。充足的营养是细菌进行新陈代谢的物质基础，包括水分、无机盐类、蛋白胨和糖等。对营养要求较高的细菌还需某些生长因子。

合适的pH

环境的pH值对细菌的增殖有很大影响，因营养的吸收、分解及能量的产生，都需要酶参与反应，而酶活性必须在一定pH值和温度下才能发挥作用。大多数细菌合适的pH为7.2～7.6。少数细菌对pH的需要明显不同，如霍乱弧菌pH8.4～9.2，结核分枝杆菌pH6.5～6.8，乳酸杆菌pH5.5。

适宜的温度

细菌的生长温度分为最适温度与容许温度两种，细菌按最适温度的范围分为嗜冷菌、嗜温菌与嗜热菌，其最适温度依次为0～20℃、30～37℃和50～60℃。病原菌(人类的致病菌属于此类)属于嗜温菌。最适温度为37℃。不同细菌生长的容许温度范围也不一样。

必要的气体

细菌所需要的气体主要是氧气，有的细菌还需要CO2。根据对氧的需要程度，可将细菌分为：

(1)需氧菌：必须在有氧(空气)的情况下才能生长。

(2)微需氧菌：在5%左右的低氧压环境中才能生长。

(3)厌氧菌：必须在无氧的环境中才能生长。

(4)兼性厌氧菌：在有氧和无氧环境中均能生长。

生长曲线是将一定数量的细菌接种于液体培养基中，连续定时取样检查活菌数，以培养时间为横坐标，以活菌数的对数为纵坐标绘制的曲线，反映了细菌群体的生长繁殖规律。

可分为四个期：迟缓期，对数期，稳定期，衰亡期。

迟缓期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。

对数期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。

稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、H2O2等）积累ph下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽胞等

衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。

3.常用消毒灭菌概念、方法及其适应范围

补充：灭菌是局部所有

（4）核酸变性

4．细菌转座子、质粒及噬菌体的概念及其特点；细菌基因转移重组的类型、概念、机制及其特点

转座子（Tn）：是一类在细菌的染色体、质粒或噬菌体之间自行移动的遗传成分，它是除两端的IS外还带有其他特化功能的基因。 这些基因可随Tn的转座而发生转移重组，导致染色体突变。转座子导致的耐药性基因的播散，是自然界中细菌耐药性产生的重要原因之一。

质粒：一、概念是细菌染色体外的遗传物质，存在于细胞质中闭和环状的双链DNA。二、分类

1.根据通过细菌的接合作用进行传递与否：分为一般分子量较大如F质粒、R质粒的接合性质粒和分子量较小如志贺菌毒力质粒的非接合性质粒两类。

2.根据质粒的相容性与否：分为不相容性及相容性两类。前者指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一个宿主菌内的现象，反之为相容性。

3.根据质粒基因编码的生物学性状分类：如编码细菌性菌毛的F质粒;携带耐药性基因，使细菌产生抗菌药物耐药性的R质粒;编码大肠埃希菌细菌素的Col质粒;与细菌毒力有关的Vi质粒等（重点是F和R质粒）

三．特点1.能够自主复制，一个质粒就是一个复制子。2.可转移性，从宿主菌转到另一个细菌细胞内3.可融合性，质粒之间互相融合形成更大的质粒。4.可整合性，它可整合到宿主菌染色质DNA上5.不是细菌生长繁殖所必需的物质，可因自行丢失或经人工处理而消除。6.携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学性状，有利于细菌在特定的环境下生存。

医学微生物学习方法篇二：怎样学习微生物

【学习】怎样学习微生物

相信08级的各位经过一个星期的体验之后已经对这个学期的课有了自己的看法，那么我在这里就讨论一下微生物。 在开始之前我先说说我学完这门课之后的感想：就是学完之后，我们宿舍更理直气壮的不讲卫生了。我并不是说鼓动大家不去打扫宿舍什

么的，我的意思是没有必要把自己和周围的环境...

在开始之前我先说说我学完这门课之后的感想：就是学完之后，我们宿舍更理直气壮的不讲卫生了。我并不是说鼓动大家不去打扫宿舍什么的，我的意思是没有必要把自己和周围的环境弄得过于干净，一尘不染是可以的，但是一菌不染我是不赞成的。人体要活在有细菌的环境中才能具有正常免疫力，若是脱离微生物环境太久，很容易得重病或者得自身免疫病。所以那些重度洁癖和很久都不生一次病的人非常容易一病就病的要死要活。学完

微生物之后，就会知道舒肤佳广告其实是在害人。

我在之前的介绍说过，微生物考得比较细，比较全面，加上年代久远，我个人觉得也并不能总结的有多么浓缩，我就按照书

上的章节挨个说一下。

首先大家要明白医学微生物学是研究什么的，它是研究跟医学有关的微生物的形态结构，生命活动规律以及与机体的相互关系的学科，而且这门课叫医学微生物学，而不是医学微生物病

学，所以主体是微生物本身，不要搞错了。

第二就是微生物的主要研究方法，也是这本书的结构，我们简称为“三性两法”，也就是生物学特性，致病性，免疫性，微生物学检查法，特异性预防及治疗法。不同的微生物它们的学习重点也不完全相同，有的是致病性比较重要，有的是免疫性比较

重要，等等。

前提已经讲完了，我们接下来就进入正题。

细菌学总论里，细菌形态和结构是第一个重点，而细菌的结构是重中之重。G+菌和G—菌的细胞壁结构，成分，G—菌的胞壁特殊成分，以及功能都是要掌握的，因为细菌的细胞壁与抗菌药物的杀菌效果有非常大的关系。细菌的特殊结构也比较重要，在实验课和考试中，特殊结构是鉴别细菌的重要依据，但是具体的成分并不需要过于深究。细菌生理里，主要是掌握细菌根据需氧程度的分类，生长曲线中的对数期，以及根据代谢特点而产生的鉴别试验就可以了，其中IMViC试验是常考的。消毒灭菌只需要掌握消毒灭菌方法的种类即可。细菌的遗传变异又是一个大重点，其中基因转移和重组的种类，机制，各种方式的意义和变异结果需要牢牢掌握。细菌耐药性以掌握机制为主，耐药方式由于并没有学药理学，我相信各位看了之后也不会记得多少，因为你们还没有学药物作用的机制，比较难明白为什么这样就耐药了。细菌感染免疫重点是感染，正常菌群、机会致病菌和致病菌的概念要掌握，致病作用是重点，其中以毒力尤甚。细菌免疫并不会讲很多，因为这样会抢免疫学的饭碗。细菌检查法和防治原则在总论里并不需要太看重，因为这会在各论里详细描述，每一种微生物的检查法和防治都有所差别，不能一概而论。

噬菌体安插在细菌总论里，但是我刚才是把细菌总论先讲完再讲这个。噬菌体仍然是重点。首先要明白它是一种病毒。然后要明白噬菌体分为两类，其中温和噬菌体的生活周期以及溶原性转换是要明白的。噬菌体的应用书上没有，老师会补充，这个有

可能考选择的。

接下来是细菌的各论。球菌里重点掌握葡萄球菌属和链球菌属，其中葡萄球菌属的金黄色葡萄球菌的生物学特性、致病性和检查法，链球菌属的分类、生物学特性和检查法是首要重点，奈

瑟菌属知道有两种主要致病菌就好。

肠杆菌科又是一个大章节，这是因为这个科的很多细菌都能致重要疾病和有广泛的用途。大肠埃希菌的种类以及各自的致病特点，志贺菌属的生物学特性和所致疾病，沙门菌属的所致疾病

和检查法都是需要掌握的。

弧菌属就是霍乱弧菌为重点，它的生物学性状和致病性要掌

握。

厌氧性细菌则是以破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌为主要掌握内容。其中破伤风梭菌除了微生物学检查法都要掌握，产气荚膜梭菌则是生物学性状和所致疾病，肉毒梭菌熟悉生物学

特性和致病性即可。

分支杆菌属则是以结核分枝杆菌为重中之重。这个菌的三性两法全都要掌握，我没有讲笑。麻风分枝杆菌只需要注意它的特

殊性（如唯一不能人工培养）就可以了。

动物源性细菌里，布鲁氏菌属只需要熟悉波浪热的机制，耶尔森菌属只需熟悉鼠疫耶尔森菌的生物学特性和防治，炭疽芽胞

杆菌熟悉生物学性状即可。

医学微生物学习方法篇三：微生物培养方法

微生物的培养方法

实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。

一、接种

将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

１、接种工具和方法

在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1）

图1 接种和分离工具

1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种：

１）划线接种 这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。

２）三点接种 在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

３）穿刺接种 在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

４）浇混接种 该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

５）涂布接种 与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，(来自:WWw.HnnscY.com 博文 学习 网:医学微生物学习方法)迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。

６）液体接种 从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。

７）注射接种 该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。

８）活体接种 活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。

２、无菌操作

培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。

实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。

空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。（图2）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。

图2 斜面接种时的无菌操作

(1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞

二、分离纯化

含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（Mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。

１、倾注平板法

首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。（图３，a）

图３ 倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解

1.菌悬液 2.熔化的培养基 3.培养物 4.无菌水

２、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。（图３－５，b）

３、平板划线法

最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。（图4）当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。（图4）

４、富集培养法

富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。

图4 平板划线分离法

1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法

５、厌氧法

在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与

空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

三、培养

微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到许多外界因素的影响，如营养物浓度、温度、水分、氧气、ＰＨ等。微生物的种类不同，培养的方式和条件也不尽相同。

１、影响微生物生长的因素

微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到外界许多因素的影响。影响微生物生长的因素很多，简要介绍如下。

1) 营养物浓度

细菌的生长率与营养物的浓度有关:μ=μmax*C/(K+C) ，营养物浓度与生长率的关系曲线是典型的双曲线。

K值是细菌生长的很基本的特性常数。它的数值很小，表明细菌所需要的营养浓度非常之低，所以在自然界中，它们到处生长。然而营养太低时，细菌生长就会遇到困难，甚至还会死亡。这是因为除了生长需要能量以外，细菌还需要能量来维持它的生存。这种能量称为维持能。另一方面，随着营养物浓度的增加，生长率愈接近最大值。

２）温度

在一定的温度范围内，每种微生物都有自已的生长温度三基点：最低生长温度、最适生长温度和最高生长温度。在生长温度三基点内，微生物都能生长，但生长速率不一样。微生物只有处于最适生长温度时，生长速度才最快，代时最短。超过最低生长温度，微生物不会生长，温度太低，甚至会死亡。超过最高生长温度，微生物也要停止生长，温度过高。也会死亡。一般情况下，每种微生物的生长温度三基点是恒定的。但也常受其它环境条件的影响而发生变化。

根据微生物最适生长温度的不同，可将它们分为三个类型：

a.嗜冷微生物：其是适生长温度多数在-10℃－20℃之间

b.中温微生物：其最适生长温度一般在20℃－45℃之间

c.嗜热微生物：生长温度在45℃以上。

３）水分

水分是微生物进行生长的必要条件。芽孢、孢子萌发，首先需要水分。微生物是不能脱离水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生长，而不能生活在纯水中。各种微生物在不能生长发育的水分活性范围内，均具有狭小的适当的水分活性区域。

４）氧气

按照微生物对氧气的需要情况，可将它们分为以下五个类型。